纖維素酶R-10

1.不同酶液組合對椪柑原生質體分離的影響
摘要：以椪柑愈傷組織和試管苗葉片為試驗材料,采用纖維素酶R-10+離析酶R-10的酶液組合Ⅰ和纖維素酶Worthington+離析酶R-10的酶液組合Ⅱ進行原生質體的分離,比較這2種酶液組合對原生質體的酶解時間、產量及活性氧含量的影響.結果表明,酶液組合Ⅱ所需的酶解時間均短于酶液組合Ⅰ;酶液組合Ⅱ所獲得的原生質體產量均高于酶液組合Ⅰ,在愈傷組織中前者產量是后者的9.09倍,在葉片中前者產量是后者的5.29倍,差異顯著;酶液組合Ⅰ的愈傷組織原生質體的活性氧水平是酶液組合Ⅱ的1.96倍,且差異顯著,而對于葉肉原生質體,2種酶液組合之間的差異不顯著.因此可見,酶液組合Ⅱ更適合用于椪柑原生質體的分離.
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2.花椒原生質體分離與培養研究
摘要：以花椒試管苗葉片、愈傷組織和懸浮細胞為試驗材料,通過單因素試驗研究酶液濃度、滲透壓調節劑濃度對花椒原生質體分離的影響,并以花椒試管苗葉片分離出的原生質體為試驗材料,研究培養基種類、培養密度、不同激素配比對花椒原生質體培養的影響.結果表明,酶液濃度、滲透壓調節劑濃度對花椒原生質體分離有顯著影響.在適宜條件下,用甘露醇作花椒原生質體分離的滲透壓調節劑,濃度在0.6～0.7 mol·L-1時分離效果最佳.以花椒葉片為原生質體分離材料的最佳酶液組成為CPW-O.7 mol·L-1甘露醇+1.0％(w/v)纖維素酶R-10+ 1.5％(w/v)果膠酶,酶解時間為10 h,純化后的原生質體產量和活力分別可達82.36×105個·g-1和72.74％.以愈傷組織和懸浮細胞為分離材料的最佳酶液組成均為CPW-0.6 mol·L-1甘露醇+2.0％(w/v)纖維素酶R-10+0.5％(w/v)果膠酶,酶解12～14 h,純化后的原生質體產量及活力分別為31.26×105個·g-1、59.15％和53.87×105個·g-1、63.92％.以花椒試管苗葉片為原生質體分離材料,分離純化后的花椒原生質體在無激素的WPM培養基中,培養密度為1×105個·mL-1,培養第3天原生質體第1次分裂,2周分裂3～5次,原生質體28 d后形成微細胞團,培養60 d后可形成2 mm左右的愈傷組織.
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