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                    細胞培養-傳代培養法

                    發布日期:2011-10-18 

                     

                    傳代培養法

                    原理

                    細胞在培養瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細胞能繼續生長,同時也將細胞數量擴大,就必須進行傳代(再培養)。 傳代培養也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以,而貼壁細胞需經消化后才能分瓶。

                    材料和試劑

                    1.細胞:貼壁細胞株

                    2.試劑:0.25%胰酶、1640培養基(含10%小牛血清)

                    3.儀器和器材:倒置顯微鏡,培養箱、培養瓶、吸管、廢液缸等

                    操作步驟

                    1.吸除培養瓶內舊培養液。

                    2.向瓶內加入胰蛋白酶和EDTA混合液少許,以能覆滿瓶底為限。

                    3.置溫箱中2~5分鐘,當發現細胞質回縮,細胞間隙增大后,立即終止消化。

                    4.吸除消化液,向瓶內注入Hanks液數毫升,輕輕轉動培養瓶,把殘余消化液沖掉。注意加Hanks液沖洗細胞時,動作要輕,以免把已松動的細胞沖掉流失,如用胰蛋白酶液單獨消化,吸除胰蛋白酶液后,可不用Hanks液沖洗,直接加入培養液。

                    5.用吸管吸取營養液輕輕反復吹打瓶壁細胞,使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。

                    6.計數板計數后,把細胞懸液分成等份分裝入數個培養瓶中,置溫箱中培養。

                     

                    原理

                     

                    細胞在培養瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細胞能繼續生長,同時也將細胞數量擴大,就必須進行傳代(再培養)。 傳代培養也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以,而貼壁細胞需經消化后才能分瓶。

                    材料和試劑

                    1.細胞:貼壁細胞株

                    2.試劑:0.25%胰酶、1640培養基(含10%小牛血清)

                    3.儀器和器材:倒置顯微鏡,培養箱、培養瓶、吸管、廢液缸等

                    操作步驟

                    1.吸除培養瓶內舊培養液。

                    2.向瓶內加入胰蛋白酶和EDTA混合液少許,以能覆滿瓶底為限。

                    3.置溫箱中2~5分鐘,當發現細胞質回縮,細胞間隙增大后,立即終止消化。

                    4.吸除消化液,向瓶內注入Hanks液數毫升,輕輕轉動培養瓶,把殘余消化液沖掉。注意加Hanks液沖洗細胞時,動作要輕,以免把已松動的細胞沖掉流失,如用胰蛋白酶液單獨消化,吸除胰蛋白酶液后,可不用Hanks液沖洗,直接加入培養液。

                    5.用吸管吸取營養液輕輕反復吹打瓶壁細胞,使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。

                    6.計數板計數后,把細胞懸液分成等份分裝入數個培養瓶中,置溫箱中培養。

                     


                    最后更新:2011-10-18
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