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                    基因工程藥物的研究與開發

                    發布日期:2011-10-11 

                    1 人工合成基因
                        目前基因上程合成刃—100個堿基長度的寡核苦酸并不困難,然歷連接到表達載體上,表達一個不太長的蛋白分子,如人牛長激素釋放抑制因子只有14個氨基酸,而且基因序列明確,故采用人上合成基因后進行表達是容易辦到的。當然對于大分子蛋白,人工合成則受到限制,難度較大,近年來南京大學已合成了腫瘤壞死出于基因片段,并進行了表達,已成為國家]類新藥。

                    2.  利用cDNA文庫
                        旨先從細胞內b4日應基因轉錄刪A,將提取的dwA經逆轉錄酶作用和特殊加工處理,篩選出所需基因片段cDNA,例如要得到含干擾素(IM—。)的DNA,通常是從病毒(NDv—F)刺激誘導的淋巴細胞中提取刪,將純品IPN—mRNA在逆轉錄酶作用下獲得抓—cDNA.并將該cDNA插入質粒,在細菌中克降,通過非洲瞻煉卵或網織紅細胞的翻譯來確定是否帶有該重要基因序列,也可采用其他方法,如通過PcR擴增c用已合成的引物進行克隆,然后將這些基因序列插入能在細菌中產生大量蛋自(高效表達)的載體中。

                     3.從基因組DNA文庫中分離基因
                        首先要畝該蛋白的相關基因cDNA標記探針,然后通過分子雜交,篩選分離基因,也可以應用來自動物的向源基因的標記探針從人的DNA文庫中分離出入的基閱(因不同種族的基因往往存在DNAA匝序的保守區),一旦從基因文庫小分離到基因,便可插入載體,通過相應的真核宿主系統進行表達(如酵母茵、cHo細胞、昆蟲細胞)。
                     
                    4.基因的改造
                      近年來人們采用基因工程新技術,創造了按照人們設計需要的自然界中沒有的新型基因,并表達自然界不存在的新的蛋臼質。其方法有兩種:
                      
                    5.采用點突變技術:如將IrN的cnNA中某個或幾個氨系酸編碼子采用點突變技術使之人為地發生改變,而使抓中原來的氨基酸突變后被表達的新氨基酸所取代,從而產生新型干擾素,稱為DNs“類似物”(M咖四舊)。就新的DN—P來說,在141依出’rv(色氨酸)替代丫cYs(半腕氨酸)或IFN—p第17位的半腕氨酸編碼子M坐成ACf而被絲氨酸所取代,進而產生了側—9MrI 7,不僅使抗病毒活性發生了明顯改變,而量其穩定性也有很大變化。腫瘤壞死因子(1NF)原型意性太大,難以用于人體腫瘤治療.采用點突變后的INF衍生物仍保留原有的殺腫瘤生物學特性,促毒性大大降低。我國己研究成功,并正在作為I類新藥應用于臨床。人白細胞介素—2(比—2)不穩定,難以運輸和長期保存,采用點突變后獲褐了耐熱的幾—2突變體,解決了L—2的穩定性問題G

                     


                    最后更新:2011-10-11
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